重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖及骨代谢的调节

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.11.005

中国组织工程研究 ›› 2014, Vol. 18 ›› Issue (11): 1665-1671.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.11.005

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重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖及骨代谢的调节

张元豫¹，刘霞²，李坤³，郭永荣³，白靖平¹

¹新疆医科大学附属肿瘤医院骨科，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830000；²新疆医科大学第一附属医院病理科，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830000；³新疆维吾尔自治区人民医院骨科，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830000

修回日期:2014-01-20 出版日期:2014-03-12 发布日期:2014-03-12
通讯作者: 白靖平，主任医师，教授，博士生导师，新疆医科大学附属肿瘤医院骨科，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830000
作者简介:张元豫，男，1974年生，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市人，汉族，新疆医科大学在读博士，副主任医师，主要从事关节外科，脊柱结核诊疗的研究。
基金资助:
新疆维吾尔自治区自然科学基金(2011211A054)

Effect of recombinant Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 10 on proliferation of human osteoblasts and regulation of bone metabolism

Zhang Yuan-yu¹, Liu Xia², Li Kun³, Guo Yong-rong³, Bai Jing-ping¹

¹Department of Orthopedics, Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China; ²Department of Pathology, Affiliated First Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China; ³Department of Orthopedics, People’s Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830000, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China

Revised:2014-01-20 Online:2014-03-12 Published:2014-03-12
Contact: Bai Jing-ping, Chief physician, Professor, Doctoral supervisor, Department of Orthopedics, Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
About author:Zhang Yuan-yu, Studying for doctorate, Associate chief physician, Department of Orthopedics, Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Xinjiang Uygur Autonomous Region in China, No. 2011211A054

摘要/Abstract

摘要：

背景：结核杆菌热休克蛋白10是引起骨结核骨质溶解和吸收主要因素之一，抑制成骨细胞的增殖。核因子κB受体活化因子配体及骨保护素是影响骨代谢的重要指标。

目的：观察重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性和核因子κB受体活化因子配体mRNA及骨保护素mRNA表达的影响。
方法：将人骨髓基质干细胞定向诱导分化筛选为成骨细胞，取第3代细胞，用含质量浓度为0.1，1，10 mg/L的重组结核杆菌热休克蛋白10培养液培养，对照组成骨细胞正常培养。

结果与结论：MTT实验结果显示，与对照组相比，不同质量浓度重组结核杆菌热休克蛋白10抑制成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性(P < 0.05)。RT-PCR实验显示，与对照组相比，不同质量浓度的重组结核杆菌热休克蛋白10均增加成骨细胞中核因子κB受体活化因子配体mRNA表达(P < 0.01)，降低护骨素mRNA表达(P < 0.01)，均呈剂量依赖性，质量浓度10 mg/L的重组结核杆菌热休克蛋白10作用最明显(P < 0.01)。结果证实，重组结核杆菌热休克蛋白10抑制成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性，通过调节核因子κB受体活化因子配体mRNA及骨保护素mRNA表达而影响骨代谢。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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关键词: 组织构建, 骨组织构建, 成骨细胞, 细胞增殖, 热休克蛋白质类, 碱性磷酸酶, 新疆维吾尔自治区自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 10 (r-Mt cpn10) is one of the main factors that cause bone tuberculosis dissolution and absorption as well as inhibits the proliferation of osteoblasts. Receptor activator of nuclear factor kappa B ligand and osteoprotegerin are the important factors influencing bone metabolism.

OBJECTIVE: To observe the effect of r-Mt cpn10 on human osteoblast proliferation, alkaline phosphatase secretion, expression of receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand mRNA and osteoprotegerin mRNA.

METHODS: Human bone marrow stromal cells were induced to differentiate into osteoblasts, and osteoblasts at passage 3 were cultured with various concentrations of r-Mt cpn10 (0.1, 1, 10 mg/L). Osteoblasts cultured without r-Mt CPN10 were assigned as controls.

RESULTS AND CONCLUSION: MTT assay results showed that, compared with control group, r-Mt cpn10 at different concentrations inhibited osteoblast proliferation and alkaline phosphatase secretion (P < 0.05). RT-PCR analysis showed that, r-Mt cpn10 at different concentrations increased receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand mRNA expression (P < 0.01), and inhibited osteoprotegerin mRNA expression in a concentration-dependent manner (P < 0.01). 10 mg/L r-Mt cpn10 exhibited the strongest effect (P < 0.01). The r-Mt cpn10 can inhibit osteoblast proliferation and alkaline phosphatase activity, and it may influence bone metabolism by regulating the expression of receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand mRNA and osteoprotegerin mRNA.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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Key words: osteoblasts, cell proliferation, heat-shock proteins, alkaline phosphatase

中图分类号:

R318

张元豫，刘霞，李坤，郭永荣，白靖平. 重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖及骨代谢的调节[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(11): 1665-1671.

Zhang Yuan-yu, Liu Xia, Li Kun, Guo Yong-rong, Bai Jing-ping. Effect of recombinant Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 10 on proliferation of human osteoblasts and regulation of bone metabolism[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(11): 1665-1671.

图/表（结果） 2

2.1 体外培养的人成骨细胞的形态倒置显微镜每日观察，刚接种的成骨细胞呈球形，细胞悬液于培养液中并逐渐沉降贴壁；培养24 h后，存活细胞已完全贴壁展开，此时细胞形态不规则，多呈三角形，多角形，有较多突起，

单核呈卵圆形，1-3 个核仁，胞质丰富、胞浆清晰；传代后的细胞增殖迅速，培养三四小时，细胞开始贴壁，培养6-8 h贴壁基本完全，第3天细胞数量明显增多，培养五六天可长满瓶底，融合成片状，细胞排列更整齐、分布更均匀、生长更匀一，杂细胞已较少。原代培养约12 d细胞可长满瓶底。培养7-21 d生长期细胞分离相多见，细胞突起互相连接，汇合时，细胞呈铺路石状，并可重叠生长，重叠生长的细胞逐渐形成细胞小结，随后胶原堆积及钙盐沉积，形成不透光矿化结节(图2)。

2.2 重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖的影响 MTT实验检测显示，对照组成骨细胞吸光度随时间延长而逐渐升高，与对照组相比，0.1，1，10 mg/L重组结核杆菌热休克蛋白10组的成骨细胞吸光度随时间延长而逐渐降低，都呈时间依赖性抑制成骨细胞增殖，其中1，10 mg/L组72 h对成骨细胞增殖有抑制作用(P < 0.05)，其中 10 mg/L重组结核杆菌热休克蛋白10组的抑制作用最明显(P < 0.05)，见表1。

2.3 重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞后碱性磷酸酶活性的影响成骨细胞培养在1，3，5，7，9 d 后，进行碱性磷酸酶活性测定。

结果显示，细胞碱性磷酸酶活性随时间的延长逐渐下降，其中第1天和第5天的碱性磷酸酶活性与其他时间点相比较高，在培养第1天和第5天2个时间点上，1，10 mg/L重组结核杆菌热休克蛋白10组与对照组比较碱性磷酸酶活性明显下降(P < 0.05)，见表2。

2.4 成骨细胞的总mRNA的浓度检测和质量鉴定重组结核杆菌热休克蛋白10干预72 h后，提取各浓度干预下成骨细胞的总mRNA，经用核酸蛋白分析仪测定A_{260 nm}/A_{280 nm}，所有的样品的A_{260 nm}/A_{280 nm}均在1.7-2.0之间，提取各样品总RNA 3 μL，经10 g/L琼脂糖凝胶电泳分析，电泳结束后，在紫外灯下观查有两条带，28S和18S核糖体RNA条带非常亮而浓，没有出现因DNA污染而出现的弥散迁移带，提示未有降解和污染。

2.5 重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞护骨素、核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响重组结核杆菌热休克蛋白10干预人成骨细胞72 h，可剂量依赖性增加核因子κB受体活化因子配体mRNA表达，质量浓度10 mg/L 重组结核杆菌热休克蛋白10作用最大，约为对照组表达量的322.7倍(P < 0.01)。重组结核杆菌热休克蛋白10浓度依赖性降低护骨素mRNA表达，干预72 h，质量浓度10 mg/L 重组结核杆菌热休克蛋白10降低作用明显(P < 0.01)。骨保护素/核因子κB受体活化因子配体值动态地反应成骨或破骨两种相反的趋势，质量浓度10 mg/L重组结核杆菌热休克蛋白10的骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比值 0.001 9，相比较对照组1.07明显降低，显示倾向于破骨效应的趋势(表3)。

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引言

材料方法

设计：单一样本观察实验。

时间及地点：于2012年11月至2013年8月在新疆医科大学第一附属医院科技楼完成。

材料：

骨髓标本：骨髓取自2例骨科患者。第1例患者，男，18岁，腰痛2年，加重半年入院，入院诊断先天性L₃半椎体畸形，给予术前完善检查后行后路半椎体切除矫形融合内固定治疗，于术中取髂骨植骨时，从髂后上棘抽取骨髓 20 mL，吸入预先加有0.5 mL肝素的无菌针管备用。

第2例患者，男，12岁，跛行10年，入院诊断为先天性右侧髋关节脱位。完善检查行右侧髋关节脱位切开复位+股骨转子下短缩旋转截骨+髋臼成形，于术中取右侧髂骨植骨时，从髂前上棘抽取骨髓20 mL，吸入预先加有0.5 mL肝素的无菌针管备用^[8-9]。

2例患者术前经血、尿分析无代谢性骨病，肝、肾功能正常，排除有遗传性、血液或传染性疾病，近期无感冒等一般性感染。术前经患者同意均签伦理学知情同意书。

实验方法：

成骨细胞培养方法：将抽取的患者骨髓分装入15 mL离心管中，加入DMEM 完全培养基5 mL，1 500 r/min离心15 min，吸取上清及少量沉淀的血细胞，移至无菌培养瓶中，补足完全培养基，37 ℃，体积分数5%CO₂孵箱培养。隔日换完全培养基，倒置显微镜每日观察，培养1周后可获得大量人骨髓间充质干细胞，吸出人骨髓间充质干细胞培养瓶中培养液，PBS冲洗，加入体积分数0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化2.5 min，然后加入血清培养基中止消化，离心后去除上清液，细胞计数后，按2×10⁶/cm²接种于6孔培养板，加入成骨细胞诱导条件培养液，以后每隔2 d常规换液。

成骨细胞筛选及鉴定：诱导后的细胞经3周培养后进行成骨鉴定^[8]，一部分进行茜素红染色，培养皿弃去培养基，用PBS冲洗2次, 体积分数95%乙醇固定10 min，双蒸水冲洗3次。体积分数0.1%茜素红-Tris-HCl(pH 8.3)37 ℃， 30 min，由于茜素红是阴离子染料，很容易与钙离子以螯合方式形成复合物产生桔红色沉积即钙结节(图1A，B)。另一部分细胞进行Von Kossa染色鉴定，将另一培养皿同样弃去培养基，用PBS冲洗2次, 浸入体积分数5%硝酸银水溶液中10 min，日光或紫外光曝晒10 min，蒸馏水洗涤，再浸入体积分数5%次亚硫酸钠溶液中，蒸馏水洗，由于矿化基质中的磷酸盐(钙)、碳酸盐(钙)转变为磷酸银、碳酸银，经日光、紫外线使其还原为黑色的金属银颗粒(图1C，D)。对所形成的钙结节进行茜素红染色和Von Kossa染色鉴定，鉴定为成骨细胞后，将其余成骨细胞继续培养传至第3代用于实验。

完全培养基的组成：DMEM培养基加入体积分数10%胎牛血清，青、链霉素终浓度为100 U/mL。条件培养基组成：在完全培养基中加入地塞米松、抗坏血酸及β-甘油磷酸钠，终浓度分别为10^-⁸ mol/L，50 mg/L，10 mmol/L。

重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞增殖的影响(MTT法)：体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液将传3代的成骨细胞接种于3块96孔板上，细胞浓度为6×10⁹ L^-¹，每孔100 μL培养24 h。镜下观察，细胞贴壁后，将36孔分为4组，每组9孔。对照组9孔换DMEM培养液100 μL，3个实验组分别换含0.1，1，10 mg/L不同质量浓度重组结核杆菌热休克蛋白10的DMEM培养液100 μL。3块96孔板继续培养24，48，72 h。培养结束前4 h，每个孔中加入质量浓度5 g/L噻唑蓝20 μL。培养4 h后，吸出噻唑蓝，每孔加入150 μL二甲基亚砜，振荡1 min，使蓝色结晶溶解，用酶标仪(波长492 nm)测定各孔的吸光度值(A值)。

重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响：体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液将传 3代的成骨细胞接种于5块96孔板上，细胞浓度为 6×10⁶ L^-¹，实验分为4组，每组6孔，第3代成骨细胞按照培养基中重组结核杆菌热休克蛋白10浓度分为4组：0.1，1，10 mg/L重组结核杆菌热休克蛋白10组和对照组，细胞培养在1，3，5，7，9 d后，倾去培养液，加药收集并裂解细胞，取裂解液至96孔板，按碱性磷酸酶测定试剂盒说明要求操作，在波长490 nm下，用酶标仪进行碱性磷酸酶测定。按公式计算碱性磷酸酶活性。

碱性磷酸酶(金氏单/100 mL)=样品管吸光度×标准管酚的含量(0.005 mg)×100 mL/标准管吸光度/0.05 mL。

重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞护骨素/核因子κB受体活化因子配体 mRNA表达的影晌：药物处理：重组结核杆菌热休克蛋白10配成10 mg/L的母液，再稀释至实验所需浓度。用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液将传3代的成骨细胞接种于4块6孔板，细胞浓度为 1×10⁸ L^-¹，每孔2 mL培养24 h。镜下观察细胞贴壁后，每孔换不含及含0.1，1，10 mg/L重组结核杆菌热休克蛋白10的体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液2 mL培养72 h。

细胞内总RNA的提取：培养3 d后吸去6孔板内培养液，磷酸盐缓冲溶液冲洗3次，每孔加入1 mL TRIzol，按说明书提取细胞内总RNA。核酸蛋白分析仪检测提取RNA含量，核酸蛋白分析仪检测提取RNA含量A_{260 nm}/A_{280 nm}的比值以确定其纯度。提取的总RNA在1%琼脂糖凝胶中电泳，检测RNA的完整性。

反转录-聚合酶链反应的引物设计：根据Genebank设计核因子κB受体活化因子配体、护骨素和内参3对基因的引物、委托上海生工生物工程公司合成。

反转录及扩增：根据反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒说明书反转录得到cDNA，再用此cDNA进行扩增。骨保护素反应条件：95 ℃预变性2 min；95 ℃变性15 s；60 ℃退火60 s；72 ℃延伸1 min；共40个循环，最后72 ℃延伸10 min。核因子κB受体活化因子配体反应条件：95 ℃预变性2 min；95 ℃变性15 s；60 ℃退火60 s；72 ℃延伸1 min；共40个循环，最后72 ℃延伸10 min。内参反应条件：95 ℃预变性2 min；95 ℃变性15 s；60 ℃退火60 s； 72 ℃延伸1 min；共30个循环，最后72 ℃延伸10 min。

每组细胞检测均重复3次。检测时PCR仪采集每一反应管中荧光强度的变化，并绘制动力学曲线，得出样品荧光强度增加到阈值时的平均Ct值，由分析软件自动计算出待测基因与管家基因GAPDH比较的ΔCt值，进而计算出实验组与对照组ΔCt值比较的ΔΔCt，并依据公式基因相对水平= 1/2^ΔΔCt计算2组比较待测基因核因子κB受体活化因子配体、骨保护素基因的相对水平。

主要观察指标：①成骨细胞形态。②重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞增殖的影响。③重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。④成骨细胞的总mRNA的浓度检测和质量鉴定。⑤重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞核因子κB受体活化因子配体及护骨素mRNA表达的影响。

统计学分析：由第一作者采用SPSS 17.0软件进行数据分析。所有数据以x(_)±s表示，组间数据的差异用单因素方差分析或重复测量方差分析检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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3.1 人骨髓间充质干细胞定向诱导分化为成骨细胞 骨髓取材方便，添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠及抗坏血酸后贴壁细胞传代至第3代, 形态、生物学特性等就跟由骨、骨膜来源的成骨细胞就基本无明显的差别，具有典型的成骨细胞特性，碱性磷酸酶染色阳性率可达85%，Ⅰ型胶原、骨连接素、骨桥素表达表达阳性,生成连续的矿化结节，由此方法诱导的成骨细胞表面具有成骨细胞的特征性标志物HLA-DR和CD44^[10]，这是成骨细胞分化成功的鉴定指标，实验应用茜素红染色对培养出的细胞进行鉴定，形成连续片状和团块状桔红色的钙结节；用Von Kossa染色对培养出的细胞进行鉴定，钙盐沉积染成颗粒状和团块状的黑色钙结节。钙盐钙结节形成是鉴定经成骨诱导液诱导的细胞是否具有成骨细胞最可靠，最重要的标志-成骨能力，实验结果也验证了实验所培养的细胞就是成骨细胞，形成明显的钙结节，具有明显的成骨能力和显著的增殖能力。应用反复贴壁的方法可以去除大量的成纤维细胞，培养至第3代可以获得高纯度的典型的成骨细胞，保证了短期内获得大量功能良好的成骨细胞，并应用于成骨细胞相关实验研究。

3.2 重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞增殖的抑制作用 实验观察到：实验组与对照组相比，质量浓度0.1，1，10 mg/L的重组结核杆菌热休克蛋白10均能不同程度地抑制成骨细胞增殖，呈时间依赖性抑制成骨细胞增殖，其中10 mg/L 重组结核杆菌热休克蛋白10组72 h对成骨细胞增殖抑制作用最明显(P < 0.05)，1 mg/L 重组结核杆菌热休克蛋白10组对成骨细胞增殖也有明显抑制作用，抑制率达到了50%。实验通过碱性磷酸酶的活性测定来观察其对成骨细胞活性的影响，是因为碱性磷酸酶是骨形成必需的酶，它是识别和评价成骨细胞分化程度的早期指标，能催化分解有机磷酸释放无机磷，并增加局部无机磷酸的浓度，通过以上作用促进矿化。既往实验未就重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞的成骨能力进行检测^[5]。实验在碱性磷酸酶测定实验中观察到：不同质量浓度的重组结核杆菌热休克蛋白10对碱性磷酸酶的活性都有抑制作用，尤其是质量浓度1，10 mg/L的重组结核杆菌热休克蛋白10组的作用更明显，提示重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞的成骨活动能力和分化有抑制作用，并且呈时间-浓度依赖性的抑制，单从测得酶的浓度看，虽然有抑制，但也是部分抑制了碱性磷酸酶的活性30%-40%。

3.3 重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞骨保护素和核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响 骨结核病灶中结核杆菌及其产物引起炎症细胞的聚集，其分泌的炎症因子如：白细胞介素1，6等直接或间接的激活核因子κB受体-核因子κB受体活化因子配体-骨保护素轴系统^[11-19]，打破了由成骨细胞分泌并维持的正常核因子κB受体活化因子配体和骨保护素的比率^[20-28]，使骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比例失调，引起破骨细胞大量生成，导致骨质破坏和骨量丢失。作为结核杆菌分泌的热休克蛋白10^[29-32]，除了维持结核杆菌自身蛋白分子结构，以往实验还证实了它能引起破骨细胞的生成和成骨细胞增殖的抑制，其机制至今还不清楚，相关的研究主要集中在它的分子构象上，实验试图通过观察重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞骨保护素和核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响，来阐述结核杆菌热休克蛋白10参与病理情况下打破骨代谢平衡的原因。

用反转录-聚合酶链反应来检测重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞核因子κB受体活化因子配体，护骨素mRNA表达的影响，发现重组结核杆菌热休克蛋白10能浓度依赖性增加核因子κB受体活化因子配体mRNA表达，浓度依赖性降低护骨素mRNA表达，实验中没有出现骨保护素和核因子κB受体活化因子配体mRNA同比例的增加或减少，这必然导致骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比例失调。成骨细胞以旁分泌的方式分过多的核因子κB受体活化因子配体与破骨细胞前体的核因子κB受体受体结合，核因子κB受体胞内部分与胞内的肿瘤坏死因子受体相关蛋白TRAF6结合^[14]，诱导核因子κB通路活化并移位到细胞核内^[15]。核因子κB能增加c-fos基因的表达，阻断破骨细胞形成形成，但其mRNA表达量的下降，意味着阻止破骨细胞形成的因素消弱，从而引起破骨细胞的生成增多，造成骨质破坏和骨量丢失。从重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞核因子κB受体活化因子配体，骨保护素mRNA表达的影响的结果，提示实验应用例如：二磷酸盐等抗骨质疏松的药物辅助治疗骨结核，改善骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比率，不失为一种治疗思路和补充，当然进一步的细胞药物干预实验结果也是必须进行的。

综上所述，作者认为采用成人骨髓间充质干细胞定向诱导分化为成骨细胞的方法所获取的细胞能满足实验的要求；重组结核杆菌热休克蛋白10可以抑制成骨细胞的增殖和碱性磷酸酶活性。同时重组结核杆菌热休克蛋白10抑制成骨细胞表达护骨素mRNA，促进成骨细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA的表达，降低护骨素/核因子κB受体活化因子配体的比率，促进破骨细胞的分化和成熟。这可能是结核杆菌在骨结核病灶中引起骨质破坏和骨量丢失的原因之一。但实验仅是利用反转录-聚合酶链反应在转录水平对重组结核杆菌热休克蛋白10对成骨细胞表达护骨素和核因子κB受体活化因子配体mRNA的影响进行检测。对于该作用过程中影响基因表达的机制，蛋白表达情况等还有待进一步研究；实验所有的结论均是通过体外实验的结果推论而来的，因此结论需要进一步的体内实验来验证。引起骨结核骨质破坏的因素除了结核杆菌分泌的蛋白，还有炎症细胞分泌的众多炎症因子^[33-38]，这就提示在使用抗结核药物治疗的同时，应用改善骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比率的药物可以最大限度地保护脊柱等骨的解剖结构，减少并发症的发生。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖及骨代谢的调节

Effect of recombinant Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 10 on proliferation of human osteoblasts and regulation of bone metabolism

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